1 說(shuō)明

1.1 工作原理

紫外可見(jiàn)分光光度法是利用物質(zhì)分子對紫外可見(jiàn)光譜區的輻射的吸收來(lái)進(jìn)行分析的一種儀器分析方法。這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價(jià)電子能級的躍遷，它廣泛用于無(wú)機和有機物質(zhì)的定性和定量分析。

朗伯一一比耳定律（Lambet -Beer）是光吸收的基本定律，俗稱(chēng)光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據和基礎。當入射光波長(cháng)一定時(shí)，溶液的吸光度是吸光物質(zhì)的濃度c及吸收介質(zhì)厚度（吸收光程）的函數。其常用表達式如下（式中ε為系數）：

A=ε·c·l

紫外見(jiàn)分光光度計是基于紫外可見(jiàn)分光光度法的原理工作的常規分析儀器。根據光路設計的不同，紫外可見(jiàn)分光光度計可以分為單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長(cháng)分光光度計。

1.2 適用范圍

雙光束紫外-可見(jiàn)分光光度計（以下簡(jiǎn)稱(chēng)儀器），系指從單色器發(fā)出的單色光經(jīng)光束開(kāi)關(guān)（斬光器）分成為樣品和參比兩條光束結構的儀器。它能消除光源不穩和放大器增益變化的影響，并能自動(dòng)記錄和掃描物質(zhì)的吸收光譜圖。儀器在開(kāi)機后通常會(huì )做一些自檢，但仍應按本規程進(jìn)行檢定。儀器的波長(cháng)范圍包括195~800nm，狹縫為0.1~5nm可調。

1.3 制定依據

本規程主要參照國家計量檢定規程《JJG 178-2007紫外、可見(jiàn)、近紅外分光光度計》、《JJF 1641-2017紫外可見(jiàn)分光光度計型式評價(jià)大綱》及《中國藥典》2015年版四部指導通則“0401紫外-可見(jiàn)分光光度法”擬定。

2.項目及技術(shù)要求

2.1 波長(cháng)準確度 ≤±1.0nm（紫外光區），≤±2.0nm（500nm附近）；

    波長(cháng)重復性 ≤0.5nm。

2.2 基線(xiàn)平直度 ≤0.01 吸光度。

2.3 0%線(xiàn)噪聲  ≤0.1%，100%線(xiàn)噪聲  ≤0.5%.

2.4 吸光度準確度 應符合規定。

2.5 雜散光 <0.8%。

2.6 光譜帶寬 ≤標示帶寬±20%。

2.7 吸收池配對誤差 ≤0.5%。

3 檢測條件

3.1 環(huán)境條件

3.1.1 室溫為10~30℃，相對濕度應小于65%。

3.1.2 工作臺不受陽(yáng)光直射，室內應無(wú)腐蝕性或其它影響測定的氣體干擾。

3.1.3 周?chē)?/span>應無(wú)影響檢定的強電場(chǎng)、磁場(chǎng)和震動(dòng)。

3.1.4 儀器檢定前，須先開(kāi)機預熱半小時(shí)。

3.2 設備

鈥玻璃校正片。

3.3 標準物質(zhì)和試劑

氧化鈥（分析純）、高氯酸（分析純）、重鉻酸鉀（基準品）、硫酸（分析純）、碘化鈉（分析純）、亞硝酸鈉（分析純）。

4 檢測方法

4.1 波長(cháng)準確度和波長(cháng)重復性的檢測

4.1.1 用氧化鈥溶液的241.13、278.10、287.18、333.44、345.47、361.31、416.28、451.30、485.29、536.64和640.52nm的吸收值進(jìn)行檢定。檢定時(shí)先配制4%氧化鈥的10%高氯酸溶液，將儀器波長(cháng)設置為700~200nm范圍，狹縫小于1nm，以空氣為空白，調節透光率為100%。取上述氧化鈥溶液，置1cm石英吸收池中，放入樣品光路，以適當的掃描速度繪制氧化鈥溶液的吸收圖譜并打印出峰值，與規定值相比較。重復測定三次，取平均值，計算波長(cháng)準確度與重復性。

4.1.2 用鈥玻璃校正片代替氧化鈥溶液，測定方法同上，其尖銳吸收峰主要有279.4、287.5、333.7、360.9、418.5、460.0、484.5、536.2和637.5nm，校正片使用前必須經(jīng)過(guò)校正。

4.2 基線(xiàn)平直度的檢測

4.2.1 按儀器要求進(jìn)行基線(xiàn)校正后，調節狹縫2nm，掃描速度中速，取樣間隔1nm，樣品和參比光路均為空氣。在儀器波長(cháng)下限處加10nm，波長(cháng)上限處減50nm范圍內進(jìn)行掃描，測量圖譜中起始點(diǎn)的吸光度與圖譜中偏離起始點(diǎn)多的吸光度（即大偏離點(diǎn)）之差即為基線(xiàn)平直度。

4.2.2 允許繪制的基線(xiàn)在更換光源或濾光片時(shí)微有跳動(dòng)，必要時(shí)可在檢定前再進(jìn)行一次基線(xiàn)校正。

4.3 0%線(xiàn)噪聲和100%線(xiàn)噪聲的測定

4.3.1 儀器設置為時(shí)間掃描方式，波長(cháng)設置為250nm，狹縫1nm，樣品和參比光路均為空氣，調整透光率為100%，用適當的掃描速度做時(shí)間掃描2分鐘，觀(guān)察100%線(xiàn)的變化，然后再將擋光塊插入樣品光路，觀(guān)察0%線(xiàn)的變化2分鐘，讀出各自峰的大（谷）值的差，與規定值比較。

4.3.2 儀器設置時(shí)間掃描方式，波長(cháng)置500nm，按上述方法測定500nm波長(cháng)處的100%和0%線(xiàn)噪聲。

4.3.3 如儀器無(wú)時(shí)間掃描方式，也可將儀器波長(cháng)調至規定處，用目視觀(guān)察2分鐘，讀出各自峰的大（谷）值的差。

4.4 吸光度準確度的檢測  將儀器波長(cháng)設置于400~200nm，狹縫1nm，先用配對的吸收池均裝入0.005mol/L硫酸空白溶液，用合適的掃描速度記錄基線(xiàn)或自動(dòng)校正基線(xiàn)，然后再將樣品光路改變放0.006%重鉻酸鉀硫酸溶液0.005mol/L硫酸空白溶液，掃描并打印峰谷值，計算吸收系數，重復測定三次，取其平均值與規定的吸收系數許可范圍進(jìn)行比較，應符合表中的規定。

4.5 雜散光的檢查

測定前應將擋光塊插入樣品池，校正儀器零點(diǎn)，其透光率應為0.0%。按下表列的試劑和濃度，配置成水溶液，置1cm石英吸收池中，在規定的波長(cháng)處測定透光率，應符合表中規定。

4.6 光譜帶寬的測定

4.6.1 將儀器置于單光束能量測定方式，波長(cháng)范圍置于660~650nm，選擇小狹縫，用合適的掃描速度進(jìn)行波長(cháng)掃描，繪制氘燈譜線(xiàn)，并使氘燈峰值為滿(mǎn)量程的三分之一，測量氘峰的半峰寬即為小光譜帶寬，與規定值比較。

4.6.2 沒(méi)有氘燈的儀器選擇汞燈546.1nm（或253.7nm）的特征譜線(xiàn)同4.6.1方法掃描并計算。

4.7 吸收池配對誤差的檢測

4.7.1 取洗凈的石英吸收池盛滿(mǎn)水，在220nm處，以其中一只透光率為100%，再分別更換其它吸收池，測其透光率，凡誤差在規定范圍內的，再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液，在350nm處，以其中一只透光率為100%，分別測定其它吸收池，凡透光率誤差在規定范圍內的即為配對的吸收池。

4.7.2 取洗凈的玻璃吸收池盛滿(mǎn)水，在660nm處，以其中一只透光率為100%，再分別更換其它吸收池，測其透光率，凡誤差在規定范圍內的，再分別裝入0.006%重鉻酸鉀的0.005mol/L硫酸溶液，在400nm處，以其中一只透光率為100%，分別測定其它吸收池，凡透光率誤差在規定范圍內的即為配對的吸收池。

4.7.3 由于吸收池在不同波長(cháng)吸光度有少許改變，在使用時(shí)，好先測定配對誤差，必要時(shí)應扣除。

5 檢測結果處理

自檢結果全部符合技術(shù)要求者，即為合格，可以使用。若檢測結果不符合規定，應重新調試儀器再進(jìn)行自檢，符合規定后方可使用。

6 檢驗周期

應至少每年檢測一次，重要部件的維修和更換、變動(dòng)放置地點(diǎn)、或對儀器性能有懷疑的，應按本規程隨時(shí)進(jìn)行自檢。

參考文獻

1.《T9、T10雙光束紫外-可見(jiàn)分光光度計使用說(shuō)明書(shū)》-北京普析通用儀器有限責任公司

2.《JJG 178-2007紫外、可見(jiàn)、近紅外分光光度計》

3.《JJF 1641-2017紫外可見(jiàn)分光光度計型式評價(jià)大綱》

4.《中國藥典》2015年版四部指導通則“0401紫外-可見(jiàn)分光光度法”

5.《藥品檢驗儀器自檢/核查規范》-中國食品藥品檢定研究院